Главная

Лимфоцитарно-макрофагальные кластеры

Хотя до сих пор мы предполагали, что во взаимодействие лимфоцитов с инкубированными с антигеном макрофагами вовлечены только специфичные Т-лимфоциты, примированные исследуемым антигеном, детальные исследования Верделина и сотр. показали, что это взаимодействие имеет значительно более сложный и динамичный характер. В большинстве работ Т-лимфоциты инкубировали с монослоем преинкубированных с антигеном макрофагов в течение нескольких часов, затем тщательно отмывали монослой средой и только потом Т-лимфоциты и макрофаги, оставшиеся на стекле, фиксировали глутаральдегидом и готовили к микроскопии. После этого подсчитывали число специфично связавшихся клеток. Подход, предложенный Верделином, подразумевает добавление фиксатора в культуру без предварительного отмывания с той целью, чтобы сохранить не только специфические, но и неспецифические взаимодействия.

Сканирующая электронная микро-фотография кластеров лимфоцит—макрофаг.

Периферические лимфоциты (ПЛ) прикреплены к центральному лимфоциту (ЦЛ) тонкими уроподами (Уп). Периферические лимфоциты имеют гладкую поверхность, а центральный лимфоцит — микроворсинчатую. ГП — гребенчатые псевдоподии, СМ — складки на поверхности макрофага.

Этот метод показал, что физическое взаимодействие Т-клеток морской свинки и макрофагов осуществляется в составе кластера (комплекса), состоящего из одного прикрепленного к стеклу макрофага, присоединенного к нему значительным участком своей поверхности центрального лимфоцита и нескольких периферических лимфоцитов, соединенных с центральным лимфоцитом уроподами.

Периферические лимфоциты (ПЛ) — некоторые с тонкими уроподами (Уп) и один без уропода (показан стрелкой) — прикреплены к поверхности центрального лимфоцита.

Внутри клеток и в некоторых уроподах переферических лимфоцитов видны электронно-прозрачные пузырьки (ПП). СМ — складки на поверхности макрофага, ГП — срез гребенчатой псевдоподии периферического лимфоцита, ЦЛ — центральный лимфоцит. x4600.

Этот метод показал, что физическое взаимодействие Т-клеток морской свинки и макрофагов осуществляется в составе кластера (комплекса), состоящего из одного прикрепленного к стеклу макрофага, присоединенного к нему значительным участком своей поверхности центрального лимфоцита и нескольких периферических лимфоцитов, соединенных с центральным лимфоцитом уроподами. Образование кластера начиналось с образования контакта между антиген-специфическим центральным лимфоцитом и несущим антиген макрофагом. Затем расположенные рядом лимфоциты, неспецифические в отношении антигена, с которым инкубировали макрофаги, присоединялись к центральному лимфоциту. Центральный лимфоцит (но не периферические) затем начинал синтезировать ДНК. В исследованиях, описанных выше, в которых монослой тщательно отмывали перед фиксацией, обнаруживался только центральный лимфоцит.

Таким образом, в кластере имеют место два типа физического взаимодействия: антиген-специфическое взаимодействие между макрофагом и центральным лимфоцитом и антиген-неспецифическое взаимодействие между центральным и периферическими лимфоцитами. Вряд ли поверхность центрального лимфоцита обладает просто неспецифической адгезивностью, поскольку ни гомологичные, ни гетерологичные эритроциты не прикрепляются к центральному лимфоциту. Микрокинематографические исследования показали, что периферические лимфоциты сформировавшегося кластера взаимодействуют с центральным лимфоцитом короткое время; затем они покидают кластер и заменяются новыми лимфоцитами, присутствующими в культуре. Условия взаимодействия центрального лимфоцита с периферическими можно было анализировать, встряхивая культуру с такой силой, чтобы взаимодействие центрального лимфоцита с периферическими нарушалось, а его связь с макрофагом оставалась неповрежденной. Если затем в культуру добавляли достаточное число лимфоцитов, то восстановление кластеров происходило за 4—6 ч. Исследования такого рода показали, что периферические лимфоциты не должны быть иммунны к антигену, использованному для образования кластеров, и что во взаимодействии периферических лимфоцитов с центральным не существует ограничений по I-району. Более того, В-лимфоциты также могут входить в состав кластера как периферические лимфоциты, хотя в этом случае не наблюдается образования уропод.

Хотя физическое взаимодействие между центральным лимфоцитом и инкубированным с антигеном макрофагом, по-видимому, играет решающую роль в активации антиген-специфических Т-лимфоцитов, значение связывания периферических лимфоцитов с центральным остается неясным. Возможно, это взаимодействие представляет собой физическое проявление механизма активации и размножения лимфоцитов, осуществляемого с помощью прямых физических контактов, а не растворимых факторов. Это взаимодействие требует дальнейшего изучения и может играть важную роль in vivo в формировании зародышевых центров.