Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Культивирование макрофагов и моноцитов. Оценка метода

Культуру макрофагов и моноцитов оценивают по следующим критериям:

а) внешний вид и жизнеспособность клеток;

б) клеточная однородность монослоя;

в) биохимическая активность клеток.

Обычно уже через 24 часа культивирования макрофаги выглядят как распластанные удлиненные клетки с большим количеством отростков. В культуре моноцитов это явление наблюдается только через несколько дней. Наличие токсических веществ в культуральной среде, сдвиг рН или недостаточная чистота стекол могут препятствовать распластыванию макрофагов и моноцитов, а также способствовать их отрыву от стенки сосуда. Довольно часто гетерологические сыворотки (чаще всего лошадиные), добавляемые в среду, оказываются токсичными для клеток. Поэтому применяемые гетерологические сыворотки следует предварительно проверять на цитотоксичность в отношении макрофагов и моноцитов. Из микробных загрязнений чаще всего наблюдаются дрожжевые и грибковые (недостаточно тщательная стерилизация). Сдвиг рН среды может быть обусловлен микробным загрязнением или улетучиванием СО₂. Сдвиг рН обнаруживается по изменению оранжево-красной окраски среды в желтый или фиолетовый цвет. Хотя после 30-минутной инкубации суспензии перитонеальных клеток адгезирует также довольно большое количество лимфоцитов, уже через 24 часа инкубации монослой состоит на 98% из макрофагов. Это относится как к обычным перитонеальным клеткам (ПК), так и к клеткам индуцированного (протеозопептон) перитонеального экссудата (КИПЭ). В обоих случаях приблизительно 60% от внесенного в культуру числа макрофагов оказываются в составе монослоя.

Влияние продолжительности культивирования на долю макрофагов в монослое

Примечание. Указаны средние результаты 10 определений. Цифры в скобках обозначают разброс данных

При длительном культивировании макрофаги могут в некоторых случаях быть вытеснены фибробластами. Оказавшиеся в культуре фибробласты могут быть удалены обработкой трипсином. Создавая оптимальные условия, культуру макрофагов можно поддерживать в течение более 30 недель. Обычно макрофаги не делятся в культуре. Пролиферацию можно индуцировать, добавив бесклеточную жидкость культуры фибробластов или вирус SV-40. При помощи SV-40 удается даже поддерживать постоянные линии макрофагов, очень похожие по своим свойствам на клетки первичной культуры. К числу биохимических свойств макрофагов и моноцитов относится, как уже упоминалось, образование интерлейкина 1. Было показано, что в условиях культивирования, близких к оптимальным, перитонеальные макрофаги мыши синтезируют относительно большие количества интерлейкина 1, который, однако, высвобождается в культуральную среду в очень незначительных количествах. липополисахарид стимулирует образование интерлейкина 1, но не влияет на его высвобождение. Частицы латекса усиливают как биосинтез интерлейкина, так и его высвобождение.