Главная


Клонирование

Антителопродуцирующие клетки называют гибридомами. В эксперименте не всегда образуется только один гибридный клон. Довольно часто образуется несколько гибридных клонов. Эти немоноклональные культуры подлежат клонированию. Первично моноклональные культуры также следует время от времени реклонировать, поскольку возникают клетки, не продуцирующие антитела, но зачастую растущие быстрее антителопродуцирующих и даже заглушающие рост последних.

Для клонирования чаще всего применяют метод предельного разведения. Гибридные клетки осторожно суспендируют в 2 мл культуральной среды, определяют концентрацию жизнеспособных клеток. Суспензию разводят так, чтобы в 1 мл содержалось 150 гибридных клеток. К 1 мл этой суспензии добавляют 2х107 сингенных ядросодержащих клеток селезенки и доводят объем до 20 мл культуральной средой. В планшет с плоскодонными лунками вносят 96 аликвот по 200 мкл. В тех лунках, где образовались моноклональные культуры (микроскопия), проверяют наличие антител.