Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Метод иммунных розеток

Метод иммунных розеток. Методика
Метод иммунных розеток. Оценка метода

Лимфоциты могут агрегировать in vitro ксеногенные эритроциты с образованием розеток или так называемых кластеров.

Метод розеток: различные формы розеток

а —кольцо эритроцитов вокруг центральной клетки не замкнуто;
б — две расположенные рядом лимфоидные клетки, одна из которых — розеткообразующая;
в — розетка в форме «морулы»; г — полярная розетка

Впервые этот феномен был описан в 1964 г. у мышеи, иммунизированных ЭБ. Иммуноадгезия носит антигенспецифический характер. Адгезия эритроцитов на поверхности центральной клетки происходит без участия комплемента, за счет антигенных рецепторов. Эти рецепторы представляют собой Ig-пoдобные структуры на мембране Т-клеток или Ig на В-клетках. При связывании антиген-детерминант с лимфоцитами происходит перераспределение рецепторов на поверхности клетки, допускающее полярное расположение эритроцитов вокруг центральной клетки (см. рисунок выше). У несенсибилизированных животных процент лимфоцитов, взаимодействующих с определенными антигенами -детерминантами, низок. В отношении ЭБ, как мультидетерминантных антигенов, количество РОК составляет обычно 10—10³ на 10⁶ лимфоцитов. После иммунизации происходит 5—100-кратное увеличение РОК.

Кинетика появления РОК в ходе иммунного ответа швейцарских мышей

1 — первичная реакция после внутривенного введения 10⁸ ЭБ;
2 — вторичная реакция после внутривенной бустер-инъекцнн 10⁴ ЭБ на 45-й день после первичной иммунизации.

Кинетика образования лимфоцитов с рецепторами к ДНФ у морской свинки после введения в подушечки стоп ДНФ₃₄-ЧСА, суспендированного в полном адъюванте Фрейнда

Первичная и вторичная реакции после бустер-инъекции одинаковой дозы АГ на 14-й день, поело первичной иммунизации.
1 — РОК в лимфатических узлах, 2 — РОК в селезенке

Антигенспецифические розетки отражают активность синтеза специфических АТ (антитело) иммунокомпетентными клетками. В зависимости от иммунологического статуса малые лимфоциты, бластные, а также плазматические клетки и макрофаги (вследствие пассивного отложения Ig) могут выполнять роль РОК- Контакт лейкоцитов и эритроцитов достигается низкоскоростным центрифугированием или просто инкубацией.

Хотя при инкубации образование розеток протекает медленнее, Т- и В-лимфоциты с низкой авидностью эффективнее вовлекаются в розеткообразование, чем при центрифугировании. Насколько АОК являются также и РОК, зависит от продолжительности и температуры инкубации. У мышей, иммунизированных ЭБ, свыше 50% от числа клеток, образующих зоны гемолиза, несут рецепторы, обусловливающие образование розеток. Если контакт лейкоцитов и эритроцитов происходит при 4°С в течение длительного времени, то обнаруживается существенно меньше РОК и совсем не обнаруживается АОК, т. е. определяются РОК, связывающие АГ за счет уже существующих рецепторов клеточной по

верхности. Согласно исследованиям Charriere, у несенсибилизированых мышей количество обнаруживаемых РОК возрастает с ростом соотношения эритроциты/лейкоциты. У иммунизированных животных при увеличении этого соотношения свыше оптимального (8:1) число РОК не увеличивается. Основное количество исследований по РОК проводится с эритроцитами барана, реже - курицы и голубя. Использование эритроцитов в качестве носителей растворимых АГ наряду с пассивной гемагглютинацией открывает новые возможности для применения метода иммунных розеток. Из всех вариантов метода иммунных розеток наилучшим образом зарекомендовал себя описанный ниже.